大鼠心肌細胞的培養(yǎng)和分離

　　目的

　　建立心肌細胞(大鼠心肌細胞)培養(yǎng)模型，用于心肌細胞體外實驗。

　　方法

　　采用胰酶消化及新生大鼠心肌細胞與非心肌細胞如成纖維細胞、血細胞等的差時貼壁法分離提純心肌細胞，建立心肌培養(yǎng)模型。

　　結果

　　心肌細胞(大鼠心肌細胞)培養(yǎng)*長成活時間達3天，心肌細胞受消化時間的影響有不同的形態(tài)表現(xiàn)。

　　結論

　　可以利用差時貼壁法分離新生鼠心肌細胞并在體外進行培養(yǎng)，胰酶消化以低濃度短時間為佳。

　　材料

　　心肌細胞的消化

　　取一只加蓋燒杯，內(nèi)放一塊用乙醚飽和的紗布，把0~3日齡的大鼠幼鼠放進該燒杯中麻醉，用2%碘酒和75%酒精消毒胸腹皮膚，在無菌條件下開胸取出心臟，立即置于4ºCD-Hanks液(mmol/L：Nacl137,Kcl5.4,Na2HPO40.37,K2HPO40.44,NaHCO34.2)中剪取心室肌，洗凈殘血，剪成約1mm³大小的組織塊，棄去D-Hanks液加入0.08%胰蛋白酶液10~15ml，于37°C靜置5min，吸出上層懸液，并加入等量的含血清培養(yǎng)基。經(jīng)終止消化后離心(1800r/min)棄上清液，加入含血清的培養(yǎng)液。吹散沉淀細胞，同條件下離心，用10%血清培養(yǎng)液制成細胞懸液，置于37°C含5%CO2培養(yǎng)箱中。

　　心肌細胞分離

　　根據(jù)心肌細胞和非心肌細胞貼壁時間的不同采用2小時差速貼壁，分別獲得心肌成纖維細胞和心肌細胞。心肌細胞按1*106個細胞/ml種于50ml培養(yǎng)液中，培養(yǎng)的前2天在心肌細胞培養(yǎng)液中加入5-溴脫氧嘧啶核苷0.1mmol/l，以抑制非心肌細胞增殖，所有培養(yǎng)的心肌細胞均每2天換液一次。

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